幽门螺杆菌基因检测试剂盒（荧光 PCR法）	Helicobacter pylori DNA Detection Kit
用途	本品用于幽门螺杆菌检测（仅用于科研使用) 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori 简称Hp）是一种世界范围人类感染的病原菌，在人群中具有较高的感染率，大量研究表明幽门螺杆菌是引胃肠相关疾病的主要致病因素
货号	MRC-H17001
规格	96T/盒
价格	2400元／套

幽门螺杆菌基因定量检测试剂盒（荧光 PCR法）说明书
【产品基本信息】
通用名称：幽门螺杆菌基因检测试剂盒（荧光 PCR法）
商品名称：幽门螺杆菌基因检测试剂盒（荧光 PCR法）
英文名称：Helicobacter pylori DNA Detection Kit
【检测原理】
本试剂盒采用特异性针对幽门螺杆菌的引物，利用聚合酶链式反应和SYBR Green荧光染料对幽门螺杆菌的特异性DNA片段进行荧光PCR检测。
【主要组成成分】
本试剂盒组成如表1

成分	支	体积
R1	1	500uL
R2	1	30uL
R3	1	370uL
P(阳性对照）	1	100uL
N	1	100uL

【产品描述】
【检测原理】 本试剂盒采用特异性针对幽门螺杆菌的引物，利用聚合酶链式反应和SYBR Green荧光染料对幽门螺杆菌的特异性DNA片段进行荧光PCR检测。
【贮存条件及有效期】
-20℃避光，贮存和运输，有效期1年，避免反复冻融。
【使用仪器】
Bio-Rad CFX系列、ABI系列。
【模板要求】
液体培养物：取培养物50μL(OD600在0.2-0.3)， 100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清1μL进行PCR反应；或者用吸头直接吸取1μL进行PCR反应。
固体培养物：挑取一环菌苔于500μL ddH2O充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清1μL进行PCR反应；或者用吸头轻轻沾取少量菌体，在PCR反应体系中吹打5-10次，然后直接进行PCR反应。 其他样品：用户可根据需要选择商业化DNA提取试剂盒。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取1µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照
【检测方法】
1.加样:取PCR管，按表2所示体系加样，瞬离（3000转/分钟，离心10秒）。
表 2 反应体系配制（反应液配制请在冰上进行）

成分	体积（uL)
R1	5uL
R2	0.3uL
R3	3.7uL
模板	1
ddH2O	To 10uL

2.扩增:将加样后的PCR管，放入荧光定量PCR仪器中，按此程序（95℃ 30s，（95℃ 5sec，60℃ 30sec）扩增40个循环，观察扩增循环数（Ct值）。
【试验成立判定】
（1） 阴性对照(N)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(P)：产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
【结果判定】
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明Hp核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明Hp核酸阴性。
（3）如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明Hp核酸阳性；否则判为样本阴性。
【产品性能指标】
（1） 最低检测限：1.0×102CFU/mL
（2）特异性：经验证，本试剂盒与肺炎衣原体、流感嗜血杆菌、志贺氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、淋球菌、乳酸杆菌、肺炎链球菌、铜绿色假单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均不会发生交叉反应。
（3）精密度：高浓度样本（n=20）阳性检出率为100%，CV%＜5%；中浓度样本（n=20）阳性检出率为100%，CV%＜5%；低浓度样本（n=20）阳性检出率为95%，CV%＜5%；阴性样本阴性检出率为100%。
【注意事项】：
1.收到产品后首先检查包装是否完好，若有破损，请及时与我们联系。
2. 确认产品无任何问题后，如果不立即使用，请将产品及时放入-20℃或-80℃。
3. 使用本产品时应注意无菌操作，避免污染。
4.试剂盒取出时，室温融化后，应3000转/分钟，离心10秒，避免试剂挂壁。
5.本试剂盒加样和检测应尽量在洁净环境下操作，避免气溶胶等交叉污染。
6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。

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2018/01/07