一、MTT实验技术 MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethyllthiahiazo(-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶d生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH4.7）的MTT溶液中溶解，利用酶标仪测定490nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好处理。实验时一般关闭净台上的日光灯来避光，这样会时实验更加模拟出真实情况。 二、MTT步骤 1,接种细胞：用含10%胎小牛血清培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul. 2,培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据实验目的和要求决定培养时间）。 3,呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配20ul) 继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO ,振荡10分钟， 使结晶物充分溶解 4，比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。 三、客户需提供资料 样本描述，相关的实验设计内容和作用时间和样本浓度等。 四、结果提供 实验结果IC50值。 五，服务周期 30个工作日。 六、服务流程