大鼠原位肝移植手术
(rat orthotopic liver transplantation,ROLT)

1 材料和方法
  1.1 实验动物及材料 健康雄性SD大鼠共260只,体质量200~250 g,受体体质量略重于供体。供体术前禁食4 h,自由饮水。受体手术前12 h禁食,自由饮用糖盐水。SD大鼠均由苏州大学动物实验中心提供。显微手术器械一套,双极电凝来自上海沪通GD350-S3。自制器械:门静脉袖套管,内径为1.70 mm,外径为1.94 mm,长3.0 mm;肝下下腔静脉袖套管,内径为2.50 mm,外径为2.75 mm,长3.0 mm;胆总管袖套管,为小儿硬膜外导管长4.0 mm。麻醉药品:氯胺酮(100 mg/2 mL)。供体肝脏灌注液:4 ℃乳酸钠林格氏液500 mL中加入肝素钠12 500 IU制成。供体肝脏保存液:4 ℃乳酸钠林格氏液。受体肝脏驱血液:贺斯。
  1.2 实验方法
  1.2.1 供体手术。供体采用氯胺酮麻醉,100 mg/kg,腹腔注射。取腹部肋缘下弧型切口,进腹后,将肠管推向左下腹,生理盐水纱布裹覆。游离肝下下腔静脉直至左肾静脉开口水平,分别电凝切断腰静脉、右肾上腺静脉。游离右侧肾动脉、右肾静脉。分离胆总管,在肝管汇合部远端约5.0 mm处剪开胆总管前壁,向近端插入胆总管插管,1号丝线结扎固定。于插管处远端剪断胆总管。游离门静脉,分离开肝固有动脉与门静脉之间的组织。分离幽门静脉,贴近门静脉处用6-0 prolene线结扎幽门静脉,线结尽可能留短。游离部分腹主动脉,用小儿细静脉留置针穿刺,1号线固定。迅速剪开膈肌,血管钳阻断胸主动脉。4 ℃供体肝脏灌注液持续灌注肝脏,流速控制在2~3 mL/min。经胸腔剪开肝上下腔静脉,平右肾静脉开口下缘剪断肝下下腔静脉,灌注液顺利流出。分离切断肝周韧带。推肝脏向下使膈肌与肝脏之间的下腔静脉壁形成轻微的张力,贴膈肌环剪断下腔静脉。电灼离断肝与食管的血管支。均匀灌注肝脏至完全苍白,约需2~3 min,电凝后切断肝动脉,在脾静脉的水平剪断门静脉,在线结的远侧剪断幽门静脉,取出供肝。置入0~4℃乳酸钠林格氏液中。
  1.2.2 修肝。修剪掉肝上下腔静脉壁上的毛刺,保留肝上下腔静脉前壁2 mm、后壁1 mm。仔细剥离门静脉壁上的脂肪组织。用微血管镊穿过自制袖套管管腔,夹住门静脉远端壁后,袖套管滑下,门静脉远端壁外翻于套管壁外,以幽门静脉的结扎线结刚好外翻于套管壁外为佳,6-0 prolene线在袖套管烙痕内结扎固定门静脉外翻壁。同法处理肝下下腔静脉。在肝上下腔静脉两角用6-0 prolene带针线各缝合一针备作为两点式缝合的支持线。
  1.2.3 受体手术。采用氯胺酮腹腔注射麻醉,80 mg/kg。肋缘下弧型切口,将肠管推向左下方,生理盐水纱布裹覆。在右肾静脉上缘平面游离肝下下腔静脉,电凝切断腰静脉、右肾上腺静脉。游离肝周韧带,电凝切断左膈静脉,充分游离肝上下腔静脉。电凝切断左肝至食管血管。游离胆总管,在分叉处切断,将远端胆总管翻向下方。游离结扎切断肝固有动脉。在幽门静脉水平上方游离门静脉。用微血管夹阻断肝下下腔静脉、门静脉,门静脉夹尽量远离肝脏,无肝期计时。在门静脉分叉处穿刺,缓慢注入(1.0~1.5 min)37 ℃驱血液2.5~3.5 mL。用Satinsky钳钳夹膈肌环阻断肝上下腔静脉,以膈肌环刚好外露在钳下缘为好。近肝切断肝上下腔静脉、门静脉和肝下下腔静脉,移去原肝。将供肝从4 ℃的保存液中取出,原位放入肝脏腔隙内。将供肝右角6-0 prolene线与受者肝上下腔静脉右侧角腔外缝合,打结并牵引。将供肝左角6-0 prolene线与受者肝上下腔静脉左侧角腔外缝合,打结,单线牵引。自左向右连续缝合腔静脉后壁,“U”字缝合右角后再作腔静脉前壁连续缝合至左侧角。肝素化生理盐水冲洗血管腔排出气泡,缝合线与右角的牵引单线打结,肝上下腔静脉缝合完成。冲洗受者门静脉断口内的血凝块,迅速套入供者门静脉袖套管,在袖套管烙痕内用1号丝线结扎。移去门静脉微血管夹及肝上下腔静脉Satinsky钳,供肝恢复血流,结束无肝期。供肝肝下下腔静脉见血后,微血管夹夹闭供肝肝下下腔静脉。将受者肝下下腔静脉微血管夹下移至右肾静脉处,肝素生理盐水冲洗掉血凝块,迅速插入供肝下腔静脉袖套管,1号丝线烙痕内结扎固定。大量40 ℃复温液冲洗供肝和腹腔复温。将胆总管支架管插入受者胆总管内,1号丝线结扎固定,大网膜覆盖供肝胆总管,固定。拭尽腹腔内40 ℃复温液。滴两滴庆大霉素于腹腔内及皮下。用1号丝线关腹。
  1.2.4 术后处理。手术结束后,酌情从阴茎背静脉补液2~3 mL。将大鼠放置在电热台板上复温30 min并持续吸氧。完全清醒后单笼喂养,自由进糖盐水,自由进食。
1.2.5迈睿可服务流程: