流式细胞仪进行细胞周期检测(PI)

一，细胞周期的定义
生命是从一代向下一代传递的连续过程，因此是一个不断更新、不断从头开始的过程。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂，结束它的子细胞的形成，或是细胞自身死亡。通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程称为细胞周期。在这一过程中，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。
二、染色的检测
PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。
三、单染色的固定方法
1. 细胞样品的准备：
收集细胞，用1ml预冷PBS洗1遍，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2. 细胞固定：
加入1ml预冷的70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4度固定2小时或更长时间（固定12-24小时可能效果更佳）。1000g离心3- 5分钟，沉淀细胞（如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或加大离心力）。弃上清，用用1ml预冷PBS洗1遍。
3. PI染色：
每个样品用0.5ml染色缓冲液（或PBS）重悬，加入25ul PI染色液（20×）、10ul RNase A（50×）。37度避光温浴30分钟。
4. 流式检测：
用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
四、服务周期
20个工作日
五、服务流程